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酶標(biāo)儀的工作原理

更新時(shí)間:2024-07-24點(diǎn)擊次數(shù):313

        酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的專用儀器又稱微孔板檢測(cè)器。可簡(jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)兩大類,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個(gè)比色計(jì),即用比色法來進(jìn)行分析。 測(cè)定一般要求測(cè)試液的最終體積在250μL以下,用一般光電比色計(jì)無法完成測(cè)試,因此對(duì)酶標(biāo)儀中的光電比色計(jì)有特殊要求。

酶標(biāo)儀實(shí)際上就是一臺(tái)變相光電比色計(jì)分光光度計(jì),其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同。光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光,進(jìn)入塑料微孔板中的待測(cè)標(biāo)本。該單色光一部分被標(biāo)本吸收,另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測(cè)器上,光電檢測(cè)器將這一待測(cè)標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號(hào),電信號(hào)經(jīng)前置放大,對(duì)數(shù)放大,模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號(hào)處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算,最后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果。微處理機(jī)還通過控制電路控制機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)X方向和Y方向的運(yùn)動(dòng)來移動(dòng)微孔板,從而實(shí)現(xiàn)自動(dòng)進(jìn)樣檢測(cè)過程。而另一些酶標(biāo)儀則是采用手工移動(dòng)微孔板進(jìn)行檢測(cè),因此省去了X,Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)和控制電路,從而使儀器更小巧,結(jié)構(gòu)也更簡(jiǎn)單。
微孔板是一種經(jīng)事先包埋專用于放置待測(cè)樣本的透明塑料板,板上有多排大小均勻一致的小孔,孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體,微孔板上每個(gè)小孔可盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液。
光是電磁波,波長(zhǎng)100nm~400nm稱為紫外光,400nm~780nm之間的光可被人眼觀察到,大于780nm稱為紅外光。人們之所以能夠看到色彩,是因?yàn)楣庹丈涞轿矬w上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色,是因?yàn)橹参镂盏拇蟛糠譃榧t橙光和藍(lán)紫光,但對(duì)綠色不吸收,反射出來,所以植物呈現(xiàn)為綠色。酶標(biāo)儀測(cè)定的原理是在特定波長(zhǎng)下,檢測(cè)被測(cè)物的吸光值。
隨著檢測(cè)方式的發(fā)展,擁有多種檢測(cè)模式的單體臺(tái)式酶標(biāo)儀叫做多功能酶標(biāo)儀,可檢測(cè)吸光度(Abs)、熒光強(qiáng)度(FI)、時(shí)間分辨熒光(TRF)、熒光偏振(FP)、和化學(xué)發(fā)光(Lum)。
酶標(biāo)儀從原理上可以分為光柵型酶標(biāo)儀和濾光片型酶標(biāo)儀。光柵型酶標(biāo)儀可以截取光源波長(zhǎng)范圍內(nèi)的任意波長(zhǎng),而濾光片型酶標(biāo)儀則根據(jù)選配的濾光片,只能截取特定波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)。
中心定位
儀器會(huì)自動(dòng)對(duì)酶標(biāo)孔進(jìn)行中心定位,中心定位是要消除酶標(biāo)孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測(cè)的不準(zhǔn)確。在對(duì)每一個(gè)酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí),儀器其實(shí)要進(jìn)行35個(gè)點(diǎn)的測(cè)量,選取最中間的5個(gè)點(diǎn)的均值為本孔的OD值。
光源的參照通道
參照通道是用來校準(zhǔn)由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來的影響。
用途和其它提示
用于ELISA試劑的測(cè)定,廣泛用于各種實(shí)驗(yàn)室,包括臨床實(shí)驗(yàn)室。
質(zhì)量控制
質(zhì)量控制是試劑檢測(cè)的重要因素。請(qǐng)按照試劑說明書的要求進(jìn)行質(zhì)量控制。
空白校正
有一些試劑盒的說明書將空白孔設(shè)置為空氣,其它大多數(shù)空白孔的設(shè)置是用試劑來設(shè)置的,請(qǐng)按照試劑盒的說明書要求進(jìn)行。
檢測(cè)結(jié)果的解釋
由于有相當(dāng)多的因素會(huì)影響檢測(cè)的結(jié)果,如不同的酶標(biāo)板,檢測(cè)試劑的體積,都會(huì)造成OD值的不同,因此,只有使用同一酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測(cè)結(jié)果才能比較和分析。對(duì)結(jié)果的臨床解釋請(qǐng)依照試劑盒的說明書進(jìn)行。



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